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(LOW-INPUT, ULTRA-DEEP, ULTRA-SENSITIVE)

海普洛斯自主的分子技术涵盖湿实验室NGS工作流程中的所有主要步骤,以实现高产量、高质量的核酸分离及测序文库构建,同时最大限度地减少测序错误。

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CUBE-ctDNA

CUBE-ctDNA是海普洛斯自主开发的单分子编码技术,用于提高超高深度测序的信噪比。在测序文库制备过程中,该技术在每个双链DNA分子模板两端分配两个单分子条形码(UMI)。基于该UMI,每个测序序列均可追溯至原始DNA模板分子。真阳性突变会出现在同一UMI的绝大多数测序序列中,而PCR扩增或测序错误引入的假阳性突变,则仅出现在小部分同一UMI的测序序列中。此外,通过双链DNA中的序列互补特性,可进一步过滤原始双链DNA分子中的单链假阳性突变。

在性能分析验证中,通过CUBE-ctDNA技术,可有效将NGS背景噪音从行业平均水平的0.1%降低到0.00058%。借此海普洛斯可将ctDNA检测限降低至0.005%水平。

CUBE-ctDNA

在性能验证研究中,与某国际分子诊断公司的cfDNA提取试剂相比,Effentration®有更高的cfDNA分离效率及更高的平均测序深度。

Effentration™

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Effentration®

DNA提取是NGS突变检测的第一个关键步骤,海普洛斯专门开发了有效的cfDNA提取技术-Effentration®,通过构建拥有自主配方的裂解液、结合液和洗涤液体系,可有效富集低丰度的cfDNA。

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HAPCap®

在文库制备过程中,需要对原始DNA模板进行PCR扩增。通常ctDNA在cfDNA中占比很少,而PCR扩增偏好性会降低ctDNA被检测到的可能性。为解决此问题,海普洛斯开发了HAPCap®。如图所示,HAPCap®通过乳液PCR技术,使模板DNA分子在物理分离的微量油包水液滴中扩增,从而有效捕获了低丰度ctDNA,提高了ctDNA突变检测灵敏度。

HAPCap®技术流程图

HAPCap技术流程图